Post by tokintes on Jul 30, 2023 3:48:48 GMT -8
制百分比。 Vero细胞系中裂谷热病毒RNA的定量RT-PCR检测 采用定量RT-PCR研究siRNA对RVFV N mRNA的抑制作用，以及不同siRNA对RVFV N mRNA的抑制程度。病毒感染24小时后从细胞培养物中收获病毒RNA；并通过 Direct-zol RNA Miniprep Plus 试剂盒（ZYMO RESEARCH CORP., USA）根据制造商说明方案从上清液中提取。RNA 洗脱在体积为 50 µL 的洗脱缓冲液中进行，并储存在 -8
0°C 直至进一步使用。SuperScript IV 一步 RT-PCR 试亚洲手机号码列表剂盒（Thermo Fisher Scientific，沃尔瑟姆，马萨诸塞州）方案采用 SYBR Green 染料以及正向引物5`被使用了。通过Primer3程序在线软件设计扩增RVFV N蛋白的引物，扩增保守N蛋白的150个核苷酸。病毒载量的相对量用Ct值表示。相对定量（RQ）（2-ΔΔCT）是一种重要的方法，对水平，并直接使用PCR系统生
成的目标基因的阈值循环并标准化为相应的β-肌动蛋白管家基因。RQ由PCR仪器软件包自动生成。 随后的反应条件为55℃10min逆转录酶激活，95℃2min逆转录酶灭活，随后40次95℃10s，55℃15s，72℃30s。使用 Applied Biosystem（Step One Applied Biosystem，福斯特城，美国）进行最后的延伸步骤，在 72°C 下进行 5 分钟。 通过蛋白质印迹测定 N 蛋白表达水平 为了确
0°C 直至进一步使用。SuperScript IV 一步 RT-PCR 试亚洲手机号码列表剂盒（Thermo Fisher Scientific，沃尔瑟姆，马萨诸塞州）方案采用 SYBR Green 染料以及正向引物5`被使用了。通过Primer3程序在线软件设计扩增RVFV N蛋白的引物，扩增保守N蛋白的150个核苷酸。病毒载量的相对量用Ct值表示。相对定量（RQ）（2-ΔΔCT）是一种重要的方法，对水平，并直接使用PCR系统生
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